鎢燈絲掃描電鏡是對(duì)樣品表面形態(tài)進(jìn)行測(cè)試的一種大型儀器。當(dāng)具有一定能量的入射電子束轟擊樣品表面時(shí),電子與元素的原子核及外層電子發(fā)生單次或多次彈性與非彈性碰撞,一些電子被反射出樣品表面,而其余的電子則滲入樣品中,逐漸失去其動(dòng)能,最后停止運(yùn)動(dòng),并被樣品吸收。在此過(guò)程中有99%以上的入射電子能量轉(zhuǎn)變成樣品熱能,而其余約1%的入射電子能量從樣品中激發(fā)出各種信號(hào)。這些信號(hào)主要包括二次電子、背散射電子、吸收電子、透射電子、俄歇電子、電子電動(dòng)勢(shì)、陰極發(fā)光、X射線等。鎢燈絲掃描電鏡就是通過(guò)這些信號(hào)得到訊息,從而對(duì)樣品進(jìn)行分析的。
鎢燈絲掃描電鏡對(duì)樣品的導(dǎo)電處理:
生物樣品經(jīng)過(guò)脫水、干燥處理后,其表面不帶電,導(dǎo)電性能也差。用掃描電鏡觀察時(shí),當(dāng)入射電子束打到樣品上,會(huì)在樣品表面產(chǎn)生電荷的積累,形成充電和放電效應(yīng),影響對(duì)圖象的觀察和拍照記錄。因此在觀察之前要進(jìn)行導(dǎo)電處理,使樣品表面導(dǎo)電。常用的導(dǎo)電方法有以下幾種:
1、組織導(dǎo)電法
用金屬鍍膜法使樣品表面導(dǎo)電,需要特殊的設(shè)備,操作比較復(fù)雜,同時(shí)對(duì)樣品有一定程度的損傷。為了克服這些不足,有人采用組織導(dǎo)電法(又稱導(dǎo)電染色法),即利用某些金屬溶液對(duì)生物樣品中的蛋白質(zhì)?脂類和醣類等成分的結(jié)合作用,使樣品表面離子化或產(chǎn)生導(dǎo)電性能好的金屬鹽類化合物,從而提高樣品耐受電子束轟擊的能力和導(dǎo)電率。
2、金屬鍍膜法
金屬鍍膜法是采用特殊裝置將電阻率小的金屬,如金、鉑、鈀等蒸發(fā)后覆蓋在樣品表面的方法。樣品鍍以金屬膜后,不僅可以防止充電、放電效應(yīng),還可以減少電子束對(duì)樣品的損傷作用,增加二次電子的產(chǎn)生率,獲得良好的圖象。